磁珠和卵白/抗体标记时期是一项首要的生物时期技能。磁珠是含磁性微粒的球体，其名义的官能团可与卵白或抗体通过化学或物理设施聚会，杀青标记。在应用方面，鄙俗用于生物医学询查中的卵白质纯化、细胞分选、免疫千里淀，以及临床会诊的免疫检测等界限。该时期具有权臣上风，它能杀青高效分离，诈欺磁场可快速从复杂混杂物等分离出倡导物，勤俭时刻；特异性高，精确拿获倡导分子，减少热闹；且操作方便，对实践确立和东谈主员时期要求相对较低，为科研与临床会诊提供了有劲复古。
标记设施
羧基磁珠标记卵白为例
1. 实践材料
羧基磁珠：选拔粒径为1μm的羧基磁珠（浓度为10mg/mL），准备100μL。
待标记卵白：倡导卵白纯度大于90%，浓度为2mg/mL，证明磁珠与卵白的联结比例（1:2-1:5），准备 300μL。
缓冲液及试剂：
活化缓冲液：0.1M MES 缓冲液（pH 6.0），准备500μL。
偶联缓冲液：PBS 缓冲液（pH 7.4），准备2mL。
张开剩余80%禁闭缓冲液：1% BSA的PBS缓冲液，准备1mL。
洗涤缓冲液：含0.05% Tween-20的PBS缓冲液，准备5mL。
活化试剂：EDC和 NHS，EDC 浓度为 50μg/mL，NHS浓度为25μg/mL，证明磁珠体积计较用量（100μL磁珠分辩对应5μgEDC和2.5μgNHS）。
2. 实践要领
2.1 磁珠活化
将100μL的羧基磁珠悬液触动至离心管中，置于磁力架上，待磁珠富饶吸附到管壁后，注意吸去上清液。
加入500μL的 0.1M MES缓冲液（pH 6.0），涡旋混匀使磁珠重悬。
分辩加入5μgEDC 和2.5μgNHS，轻轻涡旋混匀后，室温孵育30分钟，时代每隔5-10分钟轻轻倒置混匀一次，使磁珠充分活化。
2.2 卵白标记
活化扬弃后，将离心管置于磁力架上，吸去上清液。
加入500μL的PBS 缓冲液（pH 7.4），洗涤磁珠3次，每次洗涤时涡旋混匀，磁吸后吸去上清液，以去除未反映的活化试剂。
加入300μL浓度为2mg/mL的待标记卵白溶液，用PBS缓冲液补王人至500μL，轻轻涡旋混匀，使卵白与磁珠充分战争，然后在4℃下飘舞孵育2小时，确保标记反映充分进行。
2.3 禁闭未反映位点
标记反映完成后，将离心管置于磁力架上，相聚磁珠，吸去上清液。
加入1mL的1% BSA的PBS 缓冲液，涡旋混匀，室温孵育1小时，禁闭磁珠名义未反映的羧基位点，减少非特异性吸附。
2.4 洗涤去除未联结的卵白
禁闭扬弃后，将离心管置于磁力架上，弃去上清液。
加入1mL的含0.05% Tween-20的PBS 缓冲液，涡旋混匀，使磁珠充分悬浮，然后磁吸分离，吸去上清液。重叠洗涤要领5次，确保透彻去除未联结的卵白和其他杂质。
2.5 保存标记后的磁珠
将标记好的磁珠用500μL含0.1% BSA和0.02% NaN3的PBS缓冲液重悬，使其浓度为2mg/mL（磁珠浓度），并存放在4℃雪柜中备用，幸免反复冻融。
磁珠标记卵白/抗体时，影响联结成果的身分有哪些？
1. 磁珠身分：磁珠的粒径大小与比名义积关联，粒径小比名义积大，表面上联结位点更多，但过小可能不易操作和分离。其名义官能团的种类和数目至关首要，举例羧基、氨基、环氧基等，官能团数目多、活性高，与卵白或抗体的反映契机就大。磁珠的散播性也谢却疏远，散播均匀能让卵白或抗体充分战争，若发生聚会则会减少有用联结位点。
2. 卵白/抗体身分：纯度高、浓度合适的卵白或抗体更易联结，浓渡过高可能产生空间位阻或非特异性吸附，过低则碰撞联结几率小。卵白或抗体的结构齐备性影响活性基团的骄气进度，结构舒展、活性基团骄气多，与磁珠的反映就更奏凯。
3. 反映条目身分：包括缓冲液的种类、pH 值、离子强度等。符合的 pH 值能保证磁珠和卵白/抗体的电荷景况利于联结，离子强渡过高可能屏蔽电荷缩小结协力。反映温度和时刻也有影响，温度符合可加速反映速度，但过高易导致卵白或抗体变性，时刻过短反映不充分，过长可能增多杂质吸附。
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